慢病毒载体或腺病毒载体,该怎么选? 新要闻

作者: 来源: 哔哩哔哩 2023-06-04 06:39:28

 


(资料图片仅供参考)

病毒的转导效率比常规真核表达载体高很多,因此特别适合于介导外源基因在难转染甚至无法转染的哺乳动物细胞中表达。现在常用的病毒有慢病毒(Lentiviral,LV)、腺病毒(adenovirus,Ad)、腺相关病毒(Adeno-associatedvirus,AAV)以及逆转录病毒(retrovirus,RV),这些病毒载体在提高基因表达量、缩短实验周期上各有优势,根据实验目的不同,需要选择合适的病毒进行实验研究。今天小编先为大家介绍一下实验设计中慢病毒和腺病毒该如何选择,具体可根据它们各自的特点来决定(表1):

表1慢病毒和腺病毒的优缺点

但是对于很多实验来说,选择腺病毒优势更大,并且多数情况下腺病毒是可以替代慢病毒来进行实验的:

后续实验周期不太长(一个月内)。选择腺病毒比慢病毒效率更高,用慢病毒的话感染效率不会太高,效率高的话也就70%到80%这样,不能直接进行后续实验,需要筛选稳定细胞株,而筛选稳定细胞株时间至少需要两周时间,筛选过程不顺利的话,需要的时间更多,会耽误实验。而腺病毒感染效率高,很多细胞的效率可以达到99%以上,这样就不需要花费额外的时间筛选稳定细胞株,可直接进行后续实验,对于实验时间和精力上节省很多。

目的细胞感染难度大,且后续实验不需要建立稳定细胞株。对于这种情况,更推荐用腺病毒,腺病毒感染效率不仅会高很多,成本上也会节省很多。比如神经细胞,慢病毒感染效率估计只有30%这样,要把感染上的细胞分选出来继续培养才能进行后续实验,但是很多神经细胞(肿瘤细胞除外)都是不可传代的,如果筛选后几乎剩不了多少细胞,可能就无法完成后续实验。但是如果用腺病毒就不会出现这样的情况,腺病毒感染效率会比慢病毒高很多(可以达到70%左右),这样筛选出来的细胞可以直接进行后续实验,节省了时间成本。

要进行动物实验。动物实验需要的病毒量大,且病毒的滴度要很高,这样才能达到最小体积注射足够病毒的目的。慢病毒滴度较低,一般达不到动物实验的要求。纯化腺病毒滴度可达到10PFU/ml,只需少量病毒液即可感染一只小鼠或大鼠,一次包装足以完成一次动物实验研究,同时腺病毒可以扩增的,一次包装的腺病毒用完后不需要重头再次包装,而只要再扩增纯化即可,这样在经济成本和时间成本上都会节省很多。

以上便是慢病毒和腺病毒的选择参考,希望对大家有所帮助。另外,对于动物实验,通常情况下使用AAV更有优势,其安全性高、免疫源性低、适用范围广、滴度高、且能长期表达外源基因,已成为动物实验的热门工具。后续我们将为大家介绍AAV相关的知识内容,敬请期待。若有任何相关问题,欢迎咨询汉恒生物!

 

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